معرفی بهترین روش برای کشت اولیه ی سلول های کبدی ماهی هامور معمولی (Epinephelus coioides)

نوع مقاله: مقاله پژوهشی

نویسندگان

1 گروه زیست‌شناسی دریا، دانشکده علوم دریایی، دانشگاه علوم و فنون دریایی خرمشهر، خوزستان

2 1. گروه زیست شناسی دریا، دانشکده علوم دریایی و اقیانوسی، دانشگاه علوم و فنون دریایی خرمشهر 2. گروه زیست‌شناسی دریا، دانشکده علوم دریایی و اقیانوسی، دانشگاه مازندران، بابلسر، مازندران

3 گروه زیست شناسی دریا، دانشکده علوم دریایی و اقیانوسی، دانشگاه علوم و فنون دریایی خرمشهر

4 دانشگاه علوم پزشکی و خدمات درمانی جندی‌شاپور، اهواز

چکیده

کبد یکی از مهم ترین اندام های بدن مهره داران بوده که نقش مهمی در سم زدایی دارد. هدف از مطالعه ی حاضر، بررسی تاثیر نوع هضم آنزیمی، میزان درصد سرم جنین گاوی و دمای انکوباتور در کشت اولیه ی سلول های کبدی ماهی هامور معمولی (Epinephelus coioides) بود. برای انجام کار، از 5 عدد ماهی هامور معمولی استفاده شد. ابتدا بدن ماهی توسط الکل اتانول 70% ضدعفونی و پس از جدا کردن بافت کبد، توسط قیچی به قطعات ریز تقسیم شد و با استفاده از روش های متفاوت هضم آنزیمی توسط کلاژناز (تیپ 1 و 4)، تریپسین و استفاده از مواد مغذی و افزودنی در محیط کشت، سلول های آن جداسازی شدند. سپس سلول ها به مدت 2 هفته در محیط کشت Lebowitz L-15 به سه روش استفاده از هضم آنزیمی توسط تریپسین، هضم آنزیمی توسط کلاژناز (تیپ 1 و 4) و استفاده از مواد و افزودنی های مغذی، کشت داده شد. اثر شرایط متفاوت به لحاظ میزان دمای انکوباتور (20، 25، 28، 30 و32 درجه سانتیگراد) و میزان سرم جنین گاوی (0%، 10% و 20% و 20%+ITS) بر رشد سلول ها بررسی شد. براساس نتایج به دست آمده، تعداد سلول ها با استفاده از سیستم کشت هضم آنزیمی توسط آنزیم کلاژناز تیپ 4 در مقایسه با سایر روش ها بیشتر بود. در مجموع با بررسی حاضر، مناسب ترین روش برای کشت سلول های کبدی ماهی هامور معمولی، استفاده از مواد مغذی ITS، سرم جنین گاوی به میزان 20% و دمای انکوباتور C^30 تشخیص داده شده است.

کلیدواژه‌ها

موضوعات


Abdul Majeed, S., Nambi, K. S. N., Taju, G., Sundar Raj, N., Madan, N. and Sahul Hameed, A. S., 2013. Establishment and characterization of  permanent cell line from gill tissuse of Labeo rohita (Hamilton) and its application in gene expression and toxicology. Cell Biology Toxicology, 29, 59-73.

Babich, H., Borenfreund, E., 1987. Aquatic pollutants tested: in vitro with early passage fish cells. ATLA. V. 15. p. 116-22.

Babich, H. and Borenfreund, E., 1991. Cytotoxicity and genotoxicity assays with cultured fish cells: a review. Toxicology In Vitro, 5, 91-100.

Bols, N. C., 1991. Biotechnology and aquacuture: the role of cell cultures Bitechnol, Adv. 9, 31-49.

Bols, N. C., Brubacher, J. L., Ganassin, R. C. and Lee, L. E. J., 2001. Ecotoxicology and innate immunity in fish. Developmental  Computational Immunolgiae, 25, 853-873.

Blos, N. C., Dayeh, V. R., Lee, L. E. J. and Schirmer, K., 2005. Use of fish cell lines in the toxicology of fish. Piscine cell lines in environmental toxicology. Biochemistry and Molecular Biology of Fishesh, Vol, 6.

 Castano, A., Bols, N., Braunbeck, T., Dierickx, P., Halder, M., Isomaa, B., Kawahara, K., Lee, L. E., Mothersill, C., Part, P., Repetto, G., Sintes, J. R., Rufli, H., Smith, R., Wood, C. and Senger, H., 2003. The use of fish cells in ecotoxicology, ATLA31 (3), 317-351.

Clem, L. W., Bly, J. E., Wilson, M., Chinchar, V. G., Stuge, T., Baker, K., Luft, C., Rycyzyn, M., Hogan, R. J., van Lopik, T. and Miler, N. W., 1996. Fish immunology: the utility of immortalized lymphoid cells-a mini review, Vet. Immunopathol. 54.

Clement, B., Grimaud, J. A., Campion, J. P., Deugnier, Y., Guillouzo, A., 1986. Cell types involved in collagen and fibronectin production in normal and fibrotic human liver. Hepatology 6: 225-234.

Ellesat, K. S., Yazdani, M., Holth, T. F., Hylland, K., 2011. Species-dependent sensitivity to contaminants: An approach using primary hepatocyte cultures with three marine fish species. Marine Environmental Research. 72: 216-224.

Fernandes, C., Fontainhas-Fernandes, A., Rocha, E. and Salgado, M. A., 2008. Monitoring pollution in Esmoriz-Paramos, Portugal: liver histological and biochemical effects in Liza saliens. Environmental Monitoring and Assessment, 145: 315-322.

Fent, K., 2001. Fish cell lines as versatile tools in ecotoxicology: assessment of cytoxicity, cytochrome P4501A induction potential and estrogenic activity of chemicals and environmental samples. Txicology  in Vitro, 15: 477- 488.

Fraslin, J. M., Kneip, B., Vaulint, S., Glaise, D., Munnich, A., Guguen-Guillouzo, C., 1985. Dependence of hepatocyte-specific gene expression on cell-cell interactions in primary culture. EMBO J. 4: 2487-2491.

Gernhofer, M., Pawet, M., Schramm, M., Muller, E. and Triebskorn, R., 2001. Ultrastructural biomarkers as tools to characterize the health status of fish in contaminated streams. Journal of Aquatic Ecosystem. Stress and Recovery, 8: 241-260.

Hernandez-Garcia, A., Romero, D., Gomez-Ramirez, P., Maria-Mojica, P. and Martinez-Lopez, E., 2014. In vitro evaluation of cell death induced by cadmium, lead and their binary mixtures on erythrocytes of common buzzard (Buteo buteo). Toxicology in vitro, 28: 300-306.

Hinton, D. e. and Lauren, D. J., 1990. Integrative histopathological approaches to detecting effects of environmental stressors on fishes. In: Adams, S. M. (Ed.), Biological Indicators of Stress in Fish: American Fisheries Symposium 8. American Fisheries Society, Bethesda, Maryland, 51-66.

Kocal, T., Quinn, B. A., Smith, J. R., Ferguson, H. W., Hayes, M. A., 1987. Use of trout serum to prepare primary attached monolayer cultures of hepatocytes from rainbow trout (Salmo gairdneri). In Vitro Cellular & Develompent Biology. 24: 304-308.

Koment, R. W., Haines, H., 1982. Characterization of a reptilian epitheloid skin cell line derived from the green sea turttle, Chelonia mydas. In Vitro. 18, 227- 232.

Lai, Y-S., Murali, S., Ju, H- Y., Wu, M- F., Guo, I- C., Chen, S-C., Fang, K., Chang, C-Y., 2000. Two iridovirus-susceptible cell lines established from kidney and liver of grouper, Epinephelus awoara (Temminck & Schlegel), and partial characterization of grouper iridovirus. Journal of Fish Diseases. 23: 379-388.

Lu, Y., Lannan, C. N., Rohovec, J. S. and Fryer, J. L., 1990. Fish cell lines: establishment and characteriza of three new cell lines from grass carp (Ctenopharygodon idella). In Vitro Cellular and Development Biology. 26: 275-279.

Jefferson, D. M., Clayton, D. F., Darnell, J. E. Jrtion., Reid, L. M., 1984. posttrascriptional modulation of gene expression in cultured rat hepatocytes. Mol Cell Biol. 4: 1929-1934.

Montero, M., Le Belle, N., Vidal, B. and Dufour, S., 1996. Primary cultures of dispersed pituitary cells from estradiol-pretreated female liver eels (Anguilla anguilla): Immunocytochemical characterization of gonadotropic cells and stimulation of gonadotropin release. General and Comparative Endocrinology, 104 (1), pp:103-115.

Randal, J. E., 1995. Coastal fishesh of Oman. University of  Hawaii, Honolulu.

Roy, S., Chattoraj, A. and Bhattacharya, S., 2006. Arsenic induced changes in optic tecal histoarchitecture and acetyleholinesterase acetylcholine profile in Channa punctatus: amelioration by selenium. Comparative Biochemistry and Physiology. 144(1): 16-24.

Salamat, N., 2008. Study on the histological structure, cell culture and gonadotropic secretory functions of pituitary via effects assessment of these secretions on ovary in Common Carp, Cyprinus carpio. Ph.D. thesis, Shahid Chamran University. 145p.

Salvo, L. M., Malucelli, M. I. C., 2000. Primary culture of hepatic cells from Metynnis roosevelti (Pisces, Teleostei, Characidae). Braz. J. vet. Res. Anim. Sci. v. 37. n. p. 366-371.

Schimer, K., 2006. Proposal to improve vertebrate cell cultures to estabilish them as substitutes for the regulatory testing of chemicals and effluents using fish. Txicology, 224: 163-183.

Softeland, L., Holen, E., Olsvik, P. A., 2010. Toxicological application of primary hepatocyte cell cultures Atlantic cod (Gadus morhua)- Effects of BNF, PCDD and Cd. Comparative Biochemistry and Physiology. 151: 401-411.

Tju, G., Abdul Majeed, S., Nambi, K. S. N., Sarath Babu, V., Vimal, S., Kamatchiammal, S. and Sahul Hammeed, A. S., 2012. Comparison of in vivo acute toxicity assays in Etroplus suratensis (Bloch, 1970) and its three cell lines in relation to tannery effluent. Chemosphere, 87: 55-61.

Van Dyk, J. C., Pieters, G. M. and Vuren, J. H. J., 2007. Histollogical changes in the liver of Oreochromis mossambicus (Cichlidae) after exposure to cadmium and zinc. Ecotoxicology and Environmental Safety, 66: 432-440.

Wolf, K., 1988. Fish Viruses and fish viral disease. Cornell University Press, New York.

Wolf, K. and Quimby, C., 1976. Primary monolayer culture of fish cells inhibited from trypsinized tissue. TCA Manual. 2: 435-456.

Zhou, B., Liu, C., Wang, J., Lam, K. S., Wu, R. S.S., 2006. Primary cultured cells as sensitive in vitro model for assessment of toxicants-comparison to hepatocytes and gill epithelia. Aquatic Toxicology. 80: 109-118